Was erkennt der Anti-CD8-Klon TC8?
TC8 ist ein monoklonaler Mausantikörper (IgG2a/κ), der gegen ein rekombinantes Peptid des humanen CD8, des T-Zell-Korezeptors des T-Zell-Rezeptors, erzeugt wurde. Er wird als Forschungsreagenz für die Immunhistochemie an humanem formalinfixiertem, paraffineingebettetem (FFPE) Gewebe angeboten und zeigt ein membranöses Färbemuster CD8-positiver Lymphozyten.
Ist TC8 für die FFPE-Immunhistochemie dokumentiert?
Ja. Das Datenblatt gibt an, dass Klon TC8 speziell für den routinemäßigen immunhistochemischen Nachweis von CD8 in FFPE-Gewebeproben entwickelt wurde, und nennt einen Ausgangsbereich von 1:100 bis 1:200. Die ONCOdianova-Produktdokumentation dokumentiert sechs Protokolle (Dako Autostainer Link 48, Leica Bond RX, Ventana Discovery Ultra, manuell mit Autoklav, manuell mit Mikrowelle, Zweifarben-Immunfluoreszenz), und 36 Originalabbildungen von ONCOdianova zeigen CD8-positive Lymphozyten in 17 Tumorarten.
Gibt es begutachtete Publikationen mit Klon TC8?
Ja. Fünf begutachtete Studien verwendeten Klon TC8 (Katalognummer DIA-TC8): Blessin et al. 2020 (Cellular Oncology; 2.652 Tumoren aus 84 Entitäten und 608 Normalgewebe), Eichenauer et al. 2021 (World Journal of Urology; Nierenzellkarzinom), Blessin et al. 2021 (Aging; CD8 × Ki67-Multiplex in Normal-, Entzündungs- und Tumorgewebe), Blessin et al. 2021 (Cellular Oncology; CD8 × Ki67-Multiplex an 3.988 Tumoren aus sechs Krebsarten) und Fraune et al. 2020 (Annals of Surgical Oncology; Pankreaskarzinom).
Ist TC8 für die Fluoreszenz-Multiplex-IHC validiert?
Ja. Klon TC8 wurde für den Nachweis CD8-positiver TILs in Multiplex-Assays validiert; die ONCOdianova-Produktdokumentation nennt ein manuelles Zweifarben-Immunfluoreszenzprotokoll mit CD8 in Position 2, und das Datenblatt DIA-R12 zeigt einen CD8 × CD112R/PVRIG-Multiplex normaler Tonsille mit DIA-TC8. Unabhängig publizierte Evidenz umfasst zwei begutachtete Opal-Multiplexstudien (Blessin et al. 2021, Aging und Cellular Oncology), die DIA-TC8 mit 1:200 zusammen mit Ki67 einsetzten (Aging, Tabelle 5: Position 2, Opal 690). Jedes Panel wird vom Anwender für Gewebe, Antikörperreihenfolge, Demaskierung, Verdünnung und Detektion etabliert.
Welche Verdünnung sollte verwendet werden?
Das Datenblatt nennt 1:100 bis 1:200 als allgemeine Empfehlung für die IHC an FFPE-Schnitten. Die Plattformprotokolle der ONCOdianova-Produktdokumentation verwenden 1:200 (Dako, Leica, Ventana, manuell mit Autoklav, Zweifarben-Immunfluoreszenz) und 1:100 für das manuelle Mikrowellenprotokoll. Publizierte Studien verwendeten 1:200 (Dako Autostainer Link 48 und Opal-Multiplex) sowie 1:450 (manuelles Autoklavprotokoll, 60 min bei 37 °C). Verdünnung, Demaskierung und Inkubation gehören zusammen; die optimale Verdünnung wird vom Anwender für Gewebe, Fixierung, Plattform und Detektionssystem bestimmt.
Welche Epitopdemaskierung wird für TC8 verwendet?
Eine hitzeinduzierte Epitopdemaskierung ist erforderlich (Datenblatt). Die Plattformprotokolle verwenden pH 9 (15 min bei 95 °C für den Dako Autostainer Link 48, 15 min bei 100 °C für den Leica Bond RX, 24 min bei 100 °C für den Ventana Discovery Ultra); die manuellen Protokolle verwenden pH 7,8 mit Autoklav (121 °C, 5 min) oder Mikrowelle. Publizierte Studien verwendeten PT Link pH 9 (15 min bei 98 °C) für das automatisierte Hellfeldprotokoll, Autoklav pH 7,8 für das manuelle Protokoll und pH 9,0 für das Opal-Multiplexprotokoll.
Welche Positivkontrolle und welches Färbemuster sind zu erwarten?
Tonsille ist die im Datenblatt genannte Positivkontrolle; das erwartete Muster ist eine membranöse Färbung CD8-positiver Lymphozyten. Die ONCOdianova-Abbildungen zeigen CD8-positive Lymphozyten im Tumorstroma und zwischen Tumorzellen in Karzinomen von Prostata, Lunge, Ösophagus, Magen, Ovar, Vulva, Cervix, Vagina, Niere, Harnblase, Leber, Anus, Pankreas, Schilddrüse und Mundhöhle, in einem Kolonadenom und in einem Thymom.
Kann TC8 auf automatisierten Färbeplattformen eingesetzt werden?
Ja. Das Datenblatt nennt die Eignung für Ventana Discovery Ultra, Leica Bond RX und Dako Autostainer Link 48, und die ONCOdianova-Produktdokumentation gibt für jede Plattform ein Programm an (Abschnitt P·04). Zwei publizierte Studien verwendeten den Dako Autostainer Link 48 mit PT-Link-Demaskierung; die publizierten Multiplexfärbungen erfolgten manuell mit Opal-Reagenzien.
Welche Informationen liefert die CD8-Färbung mit Klon TC8?
Die CD8-Immunfärbung mit Klon TC8 stellt den CD8-Korezeptor auf der Oberfläche CD8-positiver Lymphozyten in humanen FFPE-Schnitten dar. Ihre Dichte und räumliche Verteilung – im Tumorstroma, an der Stroma-Epithel-Grenze oder zwischen Tumorzellen – können zusammen mit Morphologie und Gewebekompartiment ausgewertet werden; die publizierten Multiplexstudien kombinierten TC8 mit Ki67, um die Proliferation CD8-positiver Zellen zu erfassen, und weitere Marker können je nach Forschungsfrage ergänzt werden.
Was ist der dokumentierte Validierungsumfang des Klons TC8?
Klon TC8 wurde speziell für den routinemäßigen IHC-Nachweis von CD8 in FFPE-Gewebe entwickelt und für die Identifizierung CD8-positiver tumorinfiltrierender T-Zellen validiert, um den Nachweis von CD8 in der Tumormikroumgebung zu ermöglichen, einschließlich einer Validierung für CD8-positive TILs in Multiplex-Assays. Unabhängig publizierte klonspezifische Evidenz umfasst fünf begutachtete Studien mit mehreren tausend humanen FFPE-Tumorproben in Hellfeld- und Opal-Multiplex-IHC mit digitaler Quantifizierung.
Welches Format und welche Formulierung hat DIA-TC8?
DIA-TC8 ist ein lyophilisierter, aus Kulturüberstand gereinigter Antikörper, der mit sterilem destilliertem Wasser auf 500 µl rekonstituiert wird; das Datenblatt führt zusätzlich DIA-TC8-M, rekonstituiert auf 100 µl. Das Datenblatt nennt als Formulierung PBS, pH 7,4, mit 1 % BSA und 0,05 % Natriumazid; die ONCOdianova-Produktdokumentation gibt 100 µg pro Fläschchen an. Lagerung lyophilisiert bei 2–8 °C, langfristig bei −20 °C; rekonstituiert bei 2–8 °C für mehrere Wochen; wiederholtes Einfrieren und Auftauen vermeiden.